ELISA試劑盒擁有穩(wěn)定的重復性和可靠，是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。下面以96T的為例來給大家介紹關于ELISA試劑盒的構(gòu)成以及測定步驟：

　　試劑盒組成

　完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：

　　(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);

　　(2)酶標記的抗原或抗體(結(jié)合物);

　　(3)酶的底物;

　　(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中)，參考標準品和控制血清(定量測定中);

　　(5)結(jié)合物及標本的稀釋液;

　　(6)洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;

　　(7)酶反應終止液，常用的HRP反應終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的zui終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。

 測定步驟                            
1.加樣                            
    1. 除包被外都需45度加樣                        
    2.加樣體積要準確                        
    3.管底加樣，不能加在管壁上                        
    4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡                        
2.溫浴                            
    1.加標本后和加結(jié)合物后，應立即放入按規(guī)定的反應溫 度的水浴箱。                        
    2.各ELISA板不應疊在一起。                        
    3.為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。                        
    4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。                        
3.洗滌                            
    1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關鍵。                        
    2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。                        
4.讀板                            
    1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。                        
    2.如用酶標儀測定結(jié)果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質(zhì) 量和軟件的算法。

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